超滤法外泌体提取步骤 -凯发k8网页登录

信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-04-28 10:11:10

    外泌体是细胞释放的细胞外囊泡,包含多种生物活性分子,可作为一种治疗手段。超滤法是近年来提取外泌体的一种新方法,以下是超滤法外泌体提取的步骤。

 

细胞培养


    首先需要进行细胞培养,将细胞培养至冷冻保存前的亲代细胞数量,以确保获得足够的外泌体样品。

 

收集培养上清液


    将培养后细胞上清液收集到离心管中,用低速离心(1000*g,10分钟)去除细胞碎片和细胞核等大颗粒物,得到含有外泌体的上清液。

 

筛选上清液


    将上清液通过0.22 μm滤器筛选,去除其中的细菌和微生物等污染物,得到纯净的外泌体样品。

 

超滤离心


    将纯净的外泌体样品通过超滤离心的方式进行进一步的分离。具体操作为将外泌体样品加入一个超滤管中,然后用不同孔径的膜片进行分离。首先采用大孔径的膜片(如100 kda),过滤出体积较大的物质。接下来再采用小孔径的膜片(如10 kda),过滤出更小的物质,其中包括外泌体。将超滤液离心(10,000*g,30分钟)去除冗余液,得到外泌体样品。

 

利用印迹(western blot)验证提取效果


    利用western blot检测外泌体化纤蛋白cd63和cd9,进一步证实外泌体已经被成功提取。

 

    以上就是超滤法提取外泌体的步骤。
    相对于传统的离心法和共沉淀法等方法,超滤法具有简单、高效、保留生物活性等优点,未来有望成为外泌体提取的一种主要方法。




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