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知无不“研” | 单多抗怎么选?
文章来源:genecreate
作者:genecreate
发布时间:2020-09-22 14:01
多克隆抗体(polyclonal antibody, pab):用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,可刺激机体多个b细胞克隆,产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物,即多克隆抗体。
单克隆抗体是由单一b细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体,称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏b细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为b细胞杂交瘤。
★单多抗优缺点★
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★单多抗优缺点★
如果对抗体的特异性要求高,用量较大或需要长期使用一致的抗体,制备的抗体应用要求多(wb/ip/if/icc等),可以选择制备单克隆抗体。
多克隆抗体的特异性较差,即使是使用相同的抗原制备多抗,不同批次间也会存在差异,因而在特异性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时,更容易造成背景,例如在wb 中有杂带,在ihc 中背景较深等等。虽然还存在着交叉反应的问题,但由于多抗识别多个抗原表位,即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变,实验的结果也不会受到影响。另外多抗需要免疫原的量大,如果免疫原制备困难,建议制备单抗。
若对抗体的特异性要求不高,需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做elisa检测,可以选择制备多克隆抗体。
多抗相比较单抗仍然有制备时间短、首次制备成本低的特点,在一些情况下也是一种选择。另外,在相同条件下,使用多抗可以提高检测的灵敏度,对于丰度偏低的蛋白也更容易检出的选择.
★抗原的选择★
抗原的选择可以是天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白和多肽,抗原质量越高,最终制备高质量抗体的几率也会越大!目前抗体制备常采用重组蛋白或多肽作为抗原。
常规情况下,重组蛋白作为抗原往往含有更多的抗原决定簇,既有空间表位,也会有线形序列表位,对于机体的免疫刺激也会相对充分一些,那么最终获取应用面较广的抗体几率也会大很多,尤其是目的蛋白已证明有修饰或者复杂结构的,一般都会优先选择重组蛋白。
当然也有必须用多肽制备的,比如对同源家族某一个蛋白抗体的制备,同源性非常高的,需要找到特异性aa合成多肽,再或者一些修饰化抗体,需要在多肽合成阶段定点修饰某些aa来制备抗体。抗原多肽选择一般遵循如下基本原则1.尽可能是在蛋白表面;2.保证该段序列不形成α-helix;3.n,c端的肽段比中间的肽段更好;4.避免蛋白内部重复或接近重复段的序列;5.避免同源性太强的肽段;6.交联可以交联在n,c两端,选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端;7.序列中不能有太多的pro,但有一两个pro有好处,可以使肽链结构相对稳定一些,对产生特异性抗体有益。
抗体制备合作案例
案例一(mrjp1单抗制备)
in-depth proteome ofthe hypopharyngeal glands of honeybee workers reveals highly activated protein and energy metabolism in priming the secretion ofroyal jelly.
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polyclonal rabbitantibodies against 60s ribosomal proteins rpl28, rpl26, and 40sribosomal protein s4 (rps4), and the monoclonal mouse antibodyagainst major royal jelly protein 1 (mrjp1) were developed(genecreate biological engineering, wuhan, china).
案例二(制备chil-4和chifn-4的单抗)
multiplex immunoassay of chicken cytokines via highly-sensitive chemiluminescent imaging array,analytica chimica acta.
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for the firstincubation, the surface capture of the cytokines by their respectiveprimary antibodies anti-chil-4 and anti-chifn-γ, the subsequent clintensity value increased with increasing incubation time up to amaximum at 30 min (fig.2a). for the second step, formation of thesandwich via the attachment of the ab2-aunp-hrp probe to the exposedab1-cytokine-immunocomplex, the maximum cl value was similarlyreached with only a 25 min incubation (fig.2b).
案例三(zmrem1.3抗体)
comparative proteomics combined with analyses of transgenic plants reveal zmrem1.3 mediates maize resistance to southern corn rust. plant biotechnology journal.
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western blot analysis of zmrem1.3 in transgenic maize lines 227, 229, 231 and 233 as well as the corresponding non-transgenic sib lines, with b-actin as the loading control.
金开瑞抗体定制平台,由多位应用设计专家和工程设计专家合力打造而成,所有技术人员均拥有多年抗原设计,制备单/多克隆抗体的工业过程开发及生产经验。平台建立以来,已成功为客户制备了多种高质量抗体,其中部分达到临床应用质量标准。