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q:dna测序样品用什么溶液溶解比较好?

溶解dna测序样品时,用灭菌蒸馏水溶解最好。dna的测序反应也是taq酶的聚合反应,需要一个最佳的酶反应条件。如果dna用缓冲液溶解后,在进行测序反应时,dna溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体系条件,造成taq酶的聚合性能下降。   有很多客户在溶解dna测序样品时使用te buffer。的确,te buffer能增加dna样品保存期间的稳定性,并且te buffer对dna测序反应的影响也较小,但根据我们的经验,我们还是推荐使用灭菌蒸馏水来溶解dna测序样品。

q:提供dna测序样品时,提供何种形态的比较好?

我们推荐客户提供菌体,由我们来提取质粒,这样dna样品比较稳定。如果您可以提供dna样品,我们也很欢迎,但一定要注意样品纯度和数量。如果提供的dna量不够,我们就需要对质粒进行转化,此时需收取转化费。有些质粒提取法提取的dna质量很好,象takara、qiagen、promega的质粒制备试剂盒等。   提供的测序样品为pcr产物时,特别需要注意dna的纯度和数量。pcr产物必须进行切胶回收,否则无法得到良好的测序效果。   有关dna测序样品的详细情况请严格参照"测序样品的提供"部分的说明。

q:dna片段很长,一个反应读不到头,怎么办?

如果dna片段在载体上,可以用载体上两端的引物同时测序,让其中间交叉互补,便可完全测通。如果这样还读不通,可根据已经测出的序列设计测序引物作进一步测序(此称为primer walking法),便可完全测通。

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