t4 dna连接酶（t4 dna ligase） -凯发k8网页登录

t4 dna ligase(t4 dna连接酶)，可以催化平末端或粘性末端双链dna或rna的5'-p末端和3'-oh末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需atp作为辅助因子。同时t4 dna 连接酶可以修补双链dna、双链rna或dna/rna杂合物上的单链缺刻。
本品适用于限制性内切酶酶切片段、linker 或 adapter 等的连接，也可以用于切刻修复及ligase介导的rna检测。

产品介绍
t4 dna连接酶催化双链 dna 或 rna 上相邻的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 dna、rna 或 dna/rna 杂交双链中的单链切刻。

产品特点
无核酸外切酶和核酸内切酶残留；
稳定性好；

产品应用
限制性内切酶酶切片段、linker 或 adapter 等的连接，也可以用于切刻修复及ligase介导的rna检测。

1.在无菌微量离心管中配制以下反应体系：

注：平末端载体与dna片段进行连接时，应先将载体进行去磷酸化处理，以防发生自连接现象。为提高连接效率，每20 µl反应体系中可以加 2 µl 50% peg 4000。

2.16℃反应过夜。
3.转化实验 
1）将连接产物加入到100 µl感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的1/10），轻弹混匀，冰上孵育30 min。 
2）将离心管于42℃，热激90 sec，之后立刻置于冰水浴静置2-3 min。
3）向离心管中加入900 µl lb或soc培养基，37℃，220 rpm，振荡培养1h。
4）2500g离心5 min，吸去900 µl上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。